Tóth Kincső-Dorottya

Szakmai gyakorlatomat a Szegedi HUN-REN BIOLÓGIAI KUTATÓKÖZPONT Immunológiai Intézetének Makrofág Polarizáció Kutatócsoportjában végeztem.

A gyakorlat során lehetőségem nyílt arra, hogy egy saját kutatási projektet valósítsak meg, miközben megismerkedtem egy modern molekuláris biológiai laboratórium mindennapi működésével, a kutatómunka folyamatával és a laboratóriumban alkalmazott korszerű módszerekkel. A gyakorlat kiváló lehetőséget biztosított arra, hogy az egyetemen megszerzett elméleti ismereteimet gyakorlati környezetben is alkalmazzam.

A szakmai gyakorlat során „Citokineket kódoló gének kifejeződésének vizsgálata kontroll és TLR4 KO sejtvonalban LPS indukció hatására” című kutatási projekten dolgoztam.

A kutatás célja annak vizsgálata volt, hogy a lipopoliszacharid (LPS) indukció milyen hatással van a citokineket kódoló gének expressziójára kontroll, illetve TLR4 knockout (TLR4 KO) sejtvonalban. A kutatás során a saját mintáimmal dolgoztam, és a teljes laboratóriumi munkafolyamatot én végeztem el a témavezetőm szakmai irányítása mellett.

A gyakorlat első napján részletes ismertetőt kaptam a makrofágok szerepéről az immunrendszer működésében, valamint a kutatócsoport munkájáról.

Megbeszéltük a saját kutatásom célját, a kísérlet felépítését és az egyes munkafolyamatokat. Megismertem az RNS-izolálás elméleti alapjait, a laboratóriumi munkavégzés szabályait és a kutatóintézetben alkalmazott műszereket. Lehetőségem volt élőben is megfigyelni az RNS-izolálás folyamatát, ami nagy segítséget jelentett a későbbi önálló munkám során.

A következő napokban megkezdtem a saját kísérletem laboratóriumi előkészítését. A kutatás során iBMDM sejtvonallaldolgoztam, amelyeket előkészítettem a génexpressziós vizsgálatokhoz.

Részt vettem a sejtek plate-elésében, majd önállóan elvégeztem az RNS izolálását. Ezt követően az izolált RNS-ből komplementer DNS-t (cDNS) készítettem reverz transzkripció segítségével, amely a későbbi génexpressziós vizsgálatok alapját képezte. A laboratóriumi munka során megtapasztaltam, hogy a pontos pipettázás, a sterilitás fenntartása és a precíz munkavégzés alapvető feltétele a megbízható eredmények elérésének.

A kutatás következő lépéseként elvégeztem a kvantitatív polimeráz láncreakciót (qPCR), amelynek segítségével meghatároztuk a citokineket kódoló gének expresszióját a kontroll és a TLR4 KO sejtvonalban LPS-kezelést követően.

A vizsgálat befejezése után a kapott eredményeket a témavezetőmmel közösen kiértékeltük. Megismertem az amplifikációs görbék és a Ct-értékek értelmezését, valamint azt, hogy ezekből hogyan lehet következtetni a gének kifejeződésének mértékére.

A szakmai gyakorlat során bioinformatikai feladatokban is részt vettem. Megtanultam a PCR- és qPCR-vizsgálatokhoz szükséges primerek tervezésének alapelveit, majd önállóan négy primerpárt is megterveztem. Ez a feladat rámutatott arra, hogy a megfelelő primertervezés mennyire fontos a pontos és megbízható molekuláris biológiai vizsgálatokhoz.

A saját kutatásom mellett több alkalommal lehetőségem nyílt egérkísérletek megfigyelésére is.

Ezek során végigkövethettem a csontvelőből származó makrofágok (BMDM) előállításának folyamatát. Megfigyelhettem a csontvelő kinyerését, a sejtek előkészítését és a vörösvértestek eltávolítását, amelyek a makrofágok tenyésztésének fontos lépései. Bár ezekben a kísérletekben aktívan nem vettem részt, sokat tanultam belőlük, és jobban megértettem az immunológiai kutatásokhoz szükséges sejtek előállításának folyamatát.

A szakmai gyakorlat számomra rendkívül sok új ismeretet és gyakorlati tapasztalatot jelentett. Első alkalommal volt lehetőségem arra, hogy egy teljes molekuláris biológiai kutatási projektet végigvigyek a sejtek előkészítésétől kezdve az RNS izolálásán, a cDNS előállításán és a qPCR vizsgálaton át egészen az eredmények kiértékeléséig. Emellett fejlődött a laboratóriumi technikám, megtanultam önállóan dolgozni, valamint betekintést nyerhettem egy kutatócsoport mindennapi munkájába. A kutatócsoport minden tagja rendkívül segítőkész volt, bármikor fordulhattam hozzájuk kérdéseimmel, ami sokat segített a szakmai fejlődésemben.

A szakmai programok mellett a szabadidőm is kellemesen telt. A hét folyamán a kutatócsoporttal közösen ellátogattunk a Lapos Beachre, ahol kötetlen környezetben beszélgettünk, jobban megismerhettük egymást, valamint különböző csapatépítő játékokon vettünk részt. Ez a program kiváló lehetőséget biztosított arra, hogy a közös munka mellett személyesebb kapcsolatot is kialakítsunk egymással.

A hétvégén lehetőségem nyílt Szeged nevezetességeinek felfedezésére is. 

Meglátogattam a Dóm teret és a Fogadalmi templomot, amelyek építészeti szépségükkel nagy hatást gyakoroltak rám. Ezt követően bejártam a Dugonics teret is, ahol megtapasztalhattam a város nyugodt és barátságos hangulatát. Nagyon tetszett Szeged rendezett belvárosa, a történelmi épületek és az egyetemi város pezsgő légköre.

Összességében a szakmai gyakorlat meghatározó élményt jelentett számomra. Nemcsak számos új laboratóriumi módszert sajátítottam el – többek között az RNS-izolálást, a cDNS előállítását, a qPCR alkalmazását és a primertervezést –, hanem egy saját kutatási projektet is végigvihettem. A megszerzett tudás és gyakorlati tapasztalat megerősítette érdeklődésemet a molekuláris biológia és az immunológia iránt, valamint tovább növelte motivációmat, hogy a jövőben is kutatói pályán szeretnék dolgozni.